1收集精子

禁欲期(通常為3～5d)后，用手淫方法將精子收集于10～20mL無菌的聚丙烯樣品收集容器中。要求禁欲期是為了更好地冷凍保存樣品。通常而言，這樣的精子與收集前禁欲期較短及不規則的精子相比，冷凍保存后的特性更恒定且更完善。

射出的精液是液態的，但正常情況下立即凝結成膠狀。凝結后的精液通常在30min內液化，此時就可測定其體積。為了使精子獲得較大的冷凍存活力，應在收集精液后1min內開始對液化精子進行冷凍保存處理。

2體積的測量

體積可用較準的加樣器或帶針頭的5mL注射器來測量，有時也可根據收集精液前后采樣瓶的重量之差來計算。取0.1～0.2mL精液作精液分析(活動精子的百分數及其質量、精子密度等，參見本書有關章節)，此外尚需取出一些精液，同時以用來做篩選某種性傳染疾病的檢測、進行某些檢測以篩選導致性病的微生物如奈瑟淋球菌等(詳見有關章節)。

3甘油化

甘油作為冷凍保護劑，可以分步方式直接加入到未經處理的精液之中。每次加入后混勻，時間間隔為1min;或間接地作為擴張液或基液的組分，經稀釋后逐步加入精液。而在美國與加拿大，40%以上的著名精子庫，仍多帶帶使用甘油作為冷凍保護劑，而越來越多的新的精子庫則使用擴張劑，尤其是含甘油的兩性離子緩沖系統。

甘油化的條件不一定涉及溫度的特殊條件(除了室溫之外)和接觸時間(除了加入甘油及混勻所需時間之外)。

4包裝和存活力觀察

甘油化的精液可吸入塑料吸管(可用封口劑，加熱，或用尼龍塞來密封)或放入玻璃安瓿(用火焰封口)，也可放入塑料冷凍管(冷凍小瓶)后用螺口蓋擰緊。每份冷凍精液的體積通常是0.4～0.8mL，這可作為人工授精的一個單位。當然如果合適，人工授精也可能使用一個單位以上的精液，選擇用于冷凍保存精子的容器是很重要的。這種容器應是易于標記、操作、儲存，同樣也應具有很好的生物兼容性以及抗壓性能。高質量的聚丙烯吸管或小瓶看來符合這些標準，而沒有易碎及被洗滌劑污染等玻璃容器所具有的缺點。

放入液氮冷凍之前，除了要對被冷凍和儲備的精子進行分裝以外，還需準備一份質量控制檢測樣品。對收集后未經處理的精液、用冷凍保護劑處理過的精液以及儲存前、凍融后的精液均應觀察其中的活動精子及其活動力。通過觀察能追蹤冷凍保存各階段的精子生存情況，并能確保了解冷凍精子的存活能力。

5冷凍

吸管、安瓿中的精液冷凍保存時可分散或成組貯存，其位置保持垂直、水平或傾斜。通常是放在液氮氣霧中，有時也可放在機械(電子)冷凍柜的冷凍氣中。冷卻和冷凍過程則可用人工以靜態或逐步方式，也可用電腦控制的液氮供給系統來完成。常用的是操作者利用液氮儲存容器中的氣相以直接一次性或逐漸方式進行冷凍。帶有吸附液氮的石棉襯墊的生物干燥運送器，也能在氣相中用于冷凍，然后在液相中轉移到儲存容器。

6儲存

經分裝的樣品，均應貯存在金屬容器內的液氮之中，而這些容器則應放置在適當的液氮冷凍箱之內。用以監視液氮水平面的裝置[機械的和(或)電子的]是為了長期儲存在高于液氮溫度( -196℃)的情況下防止喪失精子功能，監視水平面的常見機械(手工)方法是將一根帶刻度的插桿垂直放入液氮底部后拔出，則在其上面就會形成一條霜線，以指示液氮水平面，至于各種復雜的局部和遙控電<愛尬聊_百科大全>子警報系統現許多國家均已有市售。另一方面，少數精子庫只使用閃爍燈定期用肉眼檢查，AATB的組織庫標準只要求一個有效的監測程序，以確保樣品始終儲存在液氮表面之下。冷凍生物學家和有關研究人員，通過融解儲存前樣品，并進行檢測，發現在冷凍剛開始期間精子活動力有某些丟失。然而以后儲存在液氮表面之下-196℃的冷凍精子，活動力沒有進一步丟失，人們已經證實癌癥患者治療前精液中的精子冷凍生存活動力往往是差的(解凍后精子活動力百分數降低)，盡管如此，這降低了的運動能力在長期儲存期間并不進一步降低。

在所調查的42家AATB成員的組織庫中，只有2家報道了精液[由正常供精者及(或)治療前患者提供]長期保存期間精子活動力喪失的例子。另有報道只有1例冷凍保存3年后精子活動力喪失。可以為人們所接受的觀點是，貯存過程中精子活動力喪失系冷凍前沒有準確測定所致或更可能是由于沒有確保較佳儲存條件所造成的。

7解凍

將裝有冷凍精子的包裝盒暴露于空氣或水中即可使冷凍精液恢復液態。通常暴露在室溫，但也可暴露在其他溫度下，這要根據各精子庫設計的方法學而定。

8分發

若臨床醫師需要冷凍精子以開展IVF-ET，精子庫應按要求送到該醫師所在醫院(或)診所。冷凍精子從精子庫的貯存柜取出后應放在預先盛有液氮或固體二氧化碳(干冰)的特殊運送盒內。然而，精子庫若就在醫院內，且離操作室甚近，則可不必放在上述特殊運送盒內，而可直接送到操作室供醫師使用。冷凍精子在送臨床使用前的融化有助于通過質量控制，再次評估精子冷凍存活狀態。